Alternativní kontrastování pro elektronovou mikroskopii

Stáhnout PDF

Autoři: Josef Špaček
Působiště autorů: Fingerlandův ústav patologie, Hradec Králové
Vyšlo v časopise: Čes.-slov. Patol., 53, 2017, No. 3, p. 143
Kategorie: Dopis redakci

Dosavadní pravidla pro nákup radioaktivních látek a manipulaci s nimi se zpřísnila a některé laboratoře elektronové mikroskopie ve světě začaly hledat náhradu za uranylacetát, rutinně používaný pro kontrastování tkáně v blocích a v ultratenkých řezech. Nebezpečí radioaktivního uranylacetátu spočívá spíše než v alfa-záření (zastavit ho může i list papíru) v kancerogenním účinku uranylacetátového prachu vdechnutého nebo požitého při neopatrné manipulaci.

Experimentálně jsme se snažili vytipovat látky, které by mohly uranylacetát nahradit, aniž by se snížila kvalita kontrastu nebo selektivní vazba na ultrastrukturální elementy. Zcela lze upustit od kontrastování uranylacetátem v bloku a při kontrastování ultratenkých řezů nahradit uranylacetát 1 % vodným roztokem manganistanu draselného nebo 2% vodným roztokem taninu, v obou případech následovaným octanem olova podle Reynoldse.

Kresba struktur je po aplikaci 1% manganistanu draselného (1/2 -1 min.), opláchnutí a Reynoldsově octanu olova (5 min.) hrubší, ale kontrast s výjimkou ribosomů je výraznější než po uranylacetátu (obr. 1A-C). Po aplikaci 2% taninu (5 min.), opláchnutí a Reynoldsově octanu olova (5 min.) je kontrast menší, ale kresba struktur je jemnější a ribosomy naopak výraznější než po manganistanu (obr. 1D). Výsledky nedosahují kvality uranylacetátu, ale alternativní volba uvedeného kontrastování odstraní administrativní i technické bezpečnostní komplikace a nepředstavuje překážku při běžné elektronmikroskopické diagnostice.

Obr. 1. Elektronogramy renálních glomerulů <b>(A, B)</b> a hepatocytu <b>(C)</b> po kontrastování ultratenkých řezů manganistanem draselným a octanem olova. Neuron s denzním oligodendrogliovým satelitem <b>(D)</b> po kontrastování taninem a octanem olova.

Adresa pro korespondenci:

Prof. MUDr. Josef Špaček, DrSc., FRMS

Fingerlandův ústav patologie

Fakultní nemocnice

Sokolská 581,

500 05 Hradec Králové

email: spacek@lfhk.cuni.cz

Zdroje

1. Lawn AM. The Use of Potassium Permanganate as an Electron-Dense Stain for Sections of Tissue Embedded in Epoxy Resin. J Biophys Biochem Cytol 1960; 7: 197-198.

2. Sawaguchi A, Ide S, Goto Y, Kawano J, Oinuma T, Suganuma T. A simple contrast enhancement by potassium permanganate oxidation for Lowicryl K4M ultrathin sections prepared by high pressure freezing/freeze substitution. J Microsc 2001; 201: 77-83.

3. Sutton JS. Potassium permanganate staining of ultrathin sections for electron microscopy. J Ultrastruct Res 1967; 21: 424-429.

4. Yamaguchi K, Suzuki K, Tanaka K. Examination of electron stains as a substitute for uranyl acetate for the ultrathin sections of bacterial cells. J Electron Microsc 2010; 59(2): 113–118.