Analýza volné fetální DNA v maternální plazmě s využitím STR lokusů

Analysis of Free Foetal DNA in Maternal Plasma Using STR Loci

Background.
Problems of maternal and foetal genotype differentiation of maternal plasma in pregnant women are solved generally by real-time systems. In this case the specific probes are used to distinguish particular genotype. Mostly gonosomal sequences are utilised to recognise the male foetus. This work describes possibilities in free foetal DNA detection and quantification by STR.

Methods and Results.
Artificial genotype mixtures ranging from 0,2 % to 100 % to simulate maternal and paternal genotypes and 27 DNA samples from pregnant women in different stage of pregnancy were used for DNA quantification and detection. Foetal genotype was confirmed by biological father genotyping. The detection was performed in STR from 21st chromosome Down syndrome (DS) responsible region by innovated (I) QF PCR which allows to reveal and quantify even very rare DNA mosaics. The STR quantification was assessed in artificial mixtures of genotypes and discriminability of particular genotypes was on the level of few percent. Foetal DNA was detected in 74 % of tested samples.

Conclusions.
The IQF PCR application in quantification and differentiation between maternal and foetal genotypes by STR loci could have importance in non-invasive prenatal diagnostics as another possible marker for DS risk assessment.

Key words:
free foetal DNA, STR quantification, QF PCR.

Autoři: R. Vodička; R. Vrtěl; M. Procházka ¹; A. Šantavá; L. Dušek ²; D. Vrbická; R. Singh; E. Krejčiříková; E. Schneiderová; J. Šantavý
Působiště autorů: Ústav lékařské genetiky a fetální medicíny FN, Olomouc ; Gynekologicko-porodnická klinika FN, Olomouc ¹; Centrum biostatistiky a analýz LF MU, Brno ²
Vyšlo v časopise: Čas. Lék. čes. 2006; 145: 133-137
Kategorie: Původní práce

Souhrn

Východisko.
Problematika rozlišení genotypů matky a plodu v maternální plazmě těhotných žen je v současnosti řešena většinou pomocí real-time systémů. V těchto případech je rozpoznání genotypů možné použitím specifických sond, rozlišující jednotlivé genotypy. Nejčastější možnost se nabízí u gonozomálních sekvencí, kdy plod je mužského pohlaví. Tato práce popisuje možnosti detekce a kvantifikace fetální DNA pomocí analýzy STR lokusů.

Metody a výsledky.
K testování kvantifikačních možností kapilární elektroforézy (KE) byly použity arteficiální směsi genotypů v rozsahu 0,2 % - 100 %, které imitují genotyp matky a plodu. K detekci fetální DNA v maternální plazmě bylo použito 27 vzorků DNA těhotných žen v různém týdnu gravidity (t.g.). Genotyp plodu byl potvrzován genotypizací biologického otce. Detekce byla prováděna v STR lokusech z 21. chromozómu z oblasti zodpovědné za Downův syndrom (DS) metodikou inovované (I)QF PCR, která umožňuje zachytit a kvantifikovat i velmi vzácné mozaiky. Kvantifikace STR lokusů na KE byla posouzena na arteficiálních mozaikách a rozlišitelnost jednotlivých mozaik byla na úrovni několika procent. Fetální DNA byla detekována u 74 % testovaných vzorků.

Závěry.
Využití IQF PCR ke kvantifikaci a rozlišení maternálního a fetálního genotypu pomocí STR lokusů by mohlo mít význam v neinvazivní prenatální diagnostice jako další možný marker pro výpočet rizika DS.

Klíčová slova:
volná fetální DNA, kvantifikace STR, QF PCR.

Štítky

Adiktologie Alergologie a imunologie Angiologie Audiologie a foniatrie Biochemie Dermatologie Dětská gastroenterologie Dětská chirurgie Dětská kardiologie Dětská neurologie Dětská otorinolaryngologie Dětská psychiatrie Dětská revmatologie Diabetologie Farmacie Chirurgie cévní Algeziologie Dentální hygienistka

Článek Cholesterol, násilí a sebevražednost – příběh plný omylů

Článek Analýza HLA-DPB1 genu u transplantací hematopoetických kmenových buněk

Článek Prenatální diagnostika tuberózní sklerózy založená na znalosti kauzální mutace

Článek Nové obzory v léčbě hemofilie – rekombinantní a transgenní koncentráty, genová léčba a modifikované koagulační faktory

Článek Psychosomatické přístupy v dermatovenerologii

Článek Zvýšené riziko malignit u heterozygotů v rodinách pacientů s Nijmegen breakage syndromem

Článek Asociace variant polymorfismů v genu pro endotelin-1 (EDN1) s terapií u pacientů s kožními T lymfomy

Článek Příspěvek k farmakogenetice chronického srdečního selhání – betablokátory

Článek Konzultačná činnosť dvoch slovenských centier pri farmakoterapii v gravidite a laktácii

Článek Opakované embolizace do periferních tepen z plicní metastázy choriokarcinomu

Článek Historie lékařské genetiky v České republice

Článek Hypertrofická kardiomyopatie