Charakterizácia polyfenoloxidázy z latexu lastovičníka väčšieho (Chelidonium majus L.)

Characterization of polyphenoloxidase from the latex of greater celandine (Chelidonium majus L.)

Greater celandine, similarly as other plants of the family Papaveraceae, produces benzylisoquinoline alkaloids, primarily benzophenanthridines. Polyphenoloxidase (PPO) is most probably involved in the formation of dopamine, which is one of the precursors of norcoclaurine, the first intermediate with the benzylisoquinoline structure. This study has revealed that PPO present in the latex of greater celandine is localized in the organelles, which serve to store alkaloids (the so-called 1000 g organelles). The enzyme was purified by means of affinity chromatography into electrophoretic homogeneity. It possesses a relative molecular mass of approximately 65 kDa and exerts two activities, the monophenolase and diphenolase ones. With the use of a polymerase chain reaction, it was possible to amplify a part of the PPO gene from the region of the active site.

Key words:
Chelidonium majus L. – polyphenoloxidase – latex – sanguinarine

Autoři: F. Bilka; M. Vanko; A. Balažová; A. Bílková; I. Holková
Působiště autorů: Univerzita Komenského v Bratislave, Farmaceutická fakulta, Katedra bunkovej a molekulárnej biológie liečiv
Vyšlo v časopise: Čes. slov. Farm., 2007; 56, 90-94
Kategorie: Původní práce

Souhrn

Lastovičník väčší podobne ako iné rastliny z čeľade Papaveraceae produkuje benzylizochinolínové alkaloidy, predovšetkým benzofenantridíny. Polyfenoloxidáza (PPO) je pravdepodobne zapojená do tvorby dopamínu, ktorý je jedným z prekurzorov norkoklaurínu, prvého intermediátu s benzylizochinolínovou štruktúrou. V rámci práce bolo zistené, že PPO prítomná v latexe lastovičníka je lokalizovaná v organelách, ktoré slúžia k uskladneniu alkaloidov (tzv. 1000 g organely). Enzým bol purifikovaný afinitnou chromatografiou do elektroforetickej homogenity, má relatívnu molekulovú hmotnosť približne 65 kDa a vykazuje dve aktivity – monofenolázovú a difenolázovú. Použitím polymerázovej reťazovej reakcie sa podarilo amplifikovať časť génu PPO z oblasti aktívneho miesta.

Kľúčové slová:
Chelidonium majus L. – polyfenoloxidáza – latex – sanguinarín