24^th EUROPEAN CONGRESS OF PATHOLOGY 2012, PRAHA - Novinky v molekulární patologii

V září letošního roku se v prostorách Kongresového centra v Praze konal 24^th European Congress of Pathology 2012. Jednalo se o výjimečnou událost, na které přednesli přední odborníci nejnovější poznatky v oblasti patologie a patologicko-molekulární diagnostiky. V průběhu pěti dnů zde byly zastoupeny všechny oblasti této královny diagnostiky. Některá klíčová sdělení zde uvedu.

Prognostický význam detekce cirkulujících melanomových buněk pomocí CellSearch^® systému u pacientů s metastazujícím melanomem

D. Giacchero (Francie) přednesl zajímavé sdělení, kde popsal metodu detekce cirkulujících nádorových buněk (CTC). Zdůraznil význam identifikace markerů, výběr nejlepší léčebné terapie a sledování účinnosti léčby u metastatického melanomu (MM) a souvislost s prognózou u různých nádorových podtypů. Ukázal, že CTC mohou být detekovány pomocí přímých a nepřímých metod, jako RT-PCR nebo imunomagnetická separace (CS).

Od června do prosince 2011 byla získána krev 27 pacientů s MM a 10 kontrol, která byla zpracována do 72 hodin metodou CS. Primárním koncovým bodem byla celková doba přežití (OS) MM pacientů. Metoda CTC (CMC M=melanomových) byla účinná u 61,5 % pacientů s MM (n = 16) a 20 % kontrolních pacientů (n = 2). Deklarované výsledky ukazují, že detekce CMC koreluje s OS u melanomů. Díky tomu může být zvolena a nasazena nejvhodnější terapie u pacientů s MM.

Exprese mikroRNA profilu a identifikace molekulární podstaty rozdílu u MYC pozitivních a negativních translokací Burkittova lymfomu

G. De Falco (Itálie) prezentovala sdělení týkající se molekulární podstaty Burkittova lymfomu (BL). Molekulárním znakem Burkittova lymfomu (BL) je dysregulace MYC onkogenu. Nicméně, asi 10 % případů BL postrádá dysregulaci MYC (není detekována translokace). U těchto případů byla zkoumána role mikroRNA.

Do studie bylo zařazeno 10 MYC pozitivních translokací a 10 MYC negativních translokací. Jednalo se o materiál fixovaný ve formalínu a zalitý do parafínu. Pro získání profilu mikroRNA a genové exprese, byly vzorky hybridizovány pomocí miRCURY^TM LNA Array a testovány Illumina DASL genomovou Assay.

Výsledky identifikovaly panel čtyř mikroRNA, které jsou diferenciálně exprimovány mezi oběma skupinami. Důležité je, že tyto mikroRNA řídí příslušné biologické procesy, jako je angiogeneze, apoptóza a proliferace. Použití tohoto přístupu ukázalo rozdíl mikroRNA a genový rozdíl mezi MYC pozitivními translokacemi a MYC negativními translokacemi u BL.

Droplet Digital PCR: vysoce citlivý test pro detekce B-Raf, K-Ras a EGFR mutací

J. Frampton (Velká Británie) ukázal vysoce sofistikovanou metodu Digital^TM PCR, která umožňuje absolutní kvantifikaci nukleových kyselin ve vzorku. Pomocí této metody sledujeme alelické frekvence mutací. Byl použit materiál fixovaný ve formaldehydu a zalitý do parafínu (FFPE). Diagnostický panel pokrýval mutace EGFR (G7l9S, T790M, L858R a L86lQ), K-ras (kodon 12) a B-Raf (V600E a V600K) obsahující alelické frekvence mezi 0,05 % a 50 %. Při testování byla prokázána korelace mezi predikcí a skutečnou alelickou frekvencí (0,05 %). Zdůraznil, že tato studie prokázala možnost detekovat pomocí Digital^TM PCR alelické frekvence až do 0,05 % genomické DNA z čištěné buněčné linie a až 3,5 % z genomické DNA extrahované z FFPE.

Kombinace mikroRNA in situ hybridizace a imunohistochemické detekce proteinových markerů

B. Nielsen (Dánsko) nastínil problematiku mikroRNA, což jsou malé nekódující RNA, které představují novou skupinu biomarkerů hrající roly v buněčné diferenciaci, proliferaci a apoptóze, tím že dojde k destabilizaci cílových mRNA. Konkrétně miR-21 je vysoce převládající u většiny malignit. Ukázal nové histologické platformy, které umožňují paralelní lokalizaci mikroRNA a bílkovinných markerů na parafínových řezech u karcinomu prsu. Sondy mikroRNA ISH byly označeny fluoresceinem tyraminem a primární protilátkou pro použití imunofluorescence. Reagencie byly naneseny na semi-automatizované platformy, HistoFlex. Pomocí kombinace miR-21 ISH a PDCD4 imunofluorescence diferencovali miR-21 pozitivní buňky a byl snížen čas testu ze 7 na 2 hodiny bez ztráty citlivosti a specifičnosti.

Srovnávací analýza MIR-155 a MIR-21 exprese MSI a MSS u karcinomu tlustého střeva komplikujícího střevního onemocnění

M. Svrček (Francie) objasnil nestabilitu mikrosatelitů (MSI) z důvodu narušení opravného mechanizmu (MMR) u kolorektálního karcinomu (CRC) u (5-10%) IBDs. Ukázal na souvislost mezi miRNA, konkrétně miR-155 a miR-21 a snížením reparačních mechnizmů MMR. Dále ukázal na zvýšenou expresi obou miRNA oproti zdravým kontrolám a tím nastínil nutnost zaměření pozornosti tímto směrem.