Stanovení koncentrace kalprotektinu ve stolici u nemocných s idiopatickými střevními záněty - srovnání dvou komerčních testů
Authors:
K. Malíčková 1; I. Janatková 1; M. Bortlík 2,3; V. Komárek 2; M. Lukáš 1,2
Authors‘ workplace:
Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky VFN a 1. LF UK v Praze
1; Klinické a výzkumné centrum pro idiopatické střevní záněty ISCARE IVF a 1. LF UK v Praze
2; Ústav biologie a lékařské genetiky VFN a 1. LF UK v Praze
3
Published in:
Epidemiol. Mikrobiol. Imunol. 57, 2008, č. 4, s. 147-153
Overview
Úvod:
Vyšetření fekálního kalprotektinu je neinvazivní, jednoduchá, časově i finančně nenáročná diagnostická metoda, sloužící k odlišení funkčních poruch zažívacího ústrojí od zánětem provázeného organického postižení a k predikci hrozícího relapsu nespecifického střevního zánětu. V posledním roce se objevily komerčně dostupné diagnostické soupravy, využívající monoklonálních nebo polyklonálních protilátek proti heterodimetickému komplexu kalprotektinu k detekci koncentrace fekálního kalprotektinu metodou enzymové imunoanalýzy (ELISA).
Cíl práce:
Srovnání dvou ELISA metod stanovení fekálního kalprotektinu, které se navzájem liší použitou protilátkou (monoklonální versus polyklonální).
Materiál a metodiky:
Byly studovány ELISA soupravy Calprotectin ELISA (Bühlmann, Bazilej, Švýcarsko), ve které je použita monoklonální protilátka, a PhiCalTM Calprotectin ELISA (R-Biopharm, Darmstadt, Německo) využívající polyklonální protilátku proti kalprotektinu. Vyšetřili jsme eluáty stolice nemocných s Crohnovou nemocí (CN, n = 36), ulcerózní kolitidou (UC, n = 29) a kontrolní vzorky, kterými byly eluáty stolice zdravých osob (n = 98). Analýzou získaných dat byly pomocí softwaru Statistica CZ 8.0 (Statsoft, Tulsa, USA) stanoveny parametry variability měření (linearita, opakovatelnost, stabilita), senzitivita a specificita testů a bylo provedeno srovnání metod.
Výsledky:
Obě studované soupravy vykázaly velmi uspokojivé hodnoty přesnosti stanovení (intra- a inter-assay < 10%). Dilučním testem linearity byly prokázány lepší hodnoty u soupravy firmy Bühlmann, a to zejména u vysokých koncentrací kalprotektinu. Výsledky získané dvěma metodami navzájem uspokojivě korelovaly: Pearsonův korelační koeficient r = 0,83, limitní diference podle Blanda-Altmana se pohybovaly v rozmezí –17% až 30%. Diagnostická senzitivita testů byla 79 % pro soupravu Calprotectin ELISA Bühlmann a 74 % pro soupravu Calprotectin ELISA R-Biopharm, specificita 87 % pro soupravu Calprotectin ELISA Bühlmann a 84 % pro soupravu Calprotectin ELISA R-Biopharm.
Závěry:
Obě studované soupravy mají dobré a srovnatelné parametry měření, u testu využívající monoklonální protilátky proti kalprotektinu jsme zjistili vyšší hodnoty senzitivity a specificity. Dostupnost, citlivost a výkonnost ELISA testů fekálního kalprotektinu lze dobře využít v klinické praxi.
Klíčová slova:
fekální kalprotektin – idiopatické střevní záněty – ELISA – monoklonální protilátka – polyklonální protilátka.
Idiopatické střevní záněty (inflammatory bowel disease, IBD) jsou chronická zánětlivá onemocnění, postihující primárně tenké a/nebo tlusté střevo. Nejdůležitějšími představiteli této medicínsky i socioekonomicky významné skupiny chorobných stavů jsou Crohnova nemoc a ulcerózní kolitida.
V uplynulých letech došlo k významnému pokroku v objasnění imunologických pochodů, souvisejících se vznikem a vývojem IBD. Dosud však není zcela jasné, zda jsou chronické zánětlivé změny střevní stěny u IBD vyvolány patologickou imunitní odpovědí vůči normálním antigenům ve střevě, nebo zda jde spíše o primárně správnou reakci imunitního systému proti dosud neznámému střevnímu antigenu, či o kombinaci obou možností. Je však zřejmé, že zánět střevní sliznice u IBD je výsledkem kaskády dějů, které vznikly jako reakce na antigen, přičemž primární „chyba“ vzniká nejspíše při předkládání tohoto antigenu T- lymfocytům, kterého se účastní enterocyty a leukocyty jako antigen-prezentující buňky nebo jako zdroje cytokinů, chemokinů a dalších prozánětlivých působků [32].
Souběžně s narůstajícím rozsahem informací o imunopatologických pochodech u IBD vzniká otázka, do jaké míry lze různé imunologické laboratorní parametry využít k diagnostice, diferenciální diagnostice, monitorování průběhu a odhadu prognózy nemoci. V diagnostice IBD se v současné době uplatňují především endoskopické a zobrazovací metody a histologické vyšetření bioptických vzorků – tedy invazivní, časově i finančně nákladné metody [25,26,27,31]. Rutinně prováděná laboratorní vyšetření přispívají k diagnostice a k určení aktivity probíhajícího zánětu, avšak mnohdy mají omezenou senzitivitu a specificitu. Systémové zánětlivé markery (sérový C-reaktivní protein, další sérové proteiny akutní fáze, sedimentace erytrocytů, krevní obraz, sérové autoprotilátky) mohou mít normální hodnoty i v případě již probíhajícího zánětu střevní sliznice [19, 20, 23, 29].
Jedním z úkolů klinické laboratorní diagnostiky je proto nalezení neinvazivního, jednoduchého, časově i finančně dostupného vyšetření, které by pomohlo detekovat zánětlivé změny na střevní sliznici, odlišit funkční poruchy zažívacího ústrojí od organického postižení a upozornit na možnost relapsu u pacienta se známou diagnózou IBD.
Podle řady recentních studií by některé z výše vyjmenovaných vlastností mohl mít fekální kalprotektin [1,2,6,16,18].
Kalprotektin (synonyma: kalgranulin A/B, S100A8/S100A9, MRP8/14) je hlavní antigenní složkou cytoplazmy neutrofilních granulocytů. Jde o 36 kDa heterodimer, složený z lehkého a těžkého řetězce, patřící do rodiny S-100 proteinů vázajících vápník. Je produkován nejenom neutrofilními granulocyty, ale i monocyty/makrofágy a některými epitely, a má významné antimikrobiální vlastnosti. Jako adhezin se účastní přestupu leukocytů z cirkulace do míst zánětu. Po aktivaci neutrofilů a adhezi monocytů k endotelu je uvolňován, působí bakteriostaticky a ovlivňuje lokální cytokinovou odpověď [3,8,30]. V posledních letech byla provedena řada studií, potvrzujících stabilitu uvolňovaného kalprotektinu ve stolici, což z něj činí vhodný marker pro rutinní laboratorní diagnostiku [5,7,9,10,14,15].
Do klinické laboratorní praxe v ČR se v posledním roce dostalo několik diagnostických souprav k detekci fekálního kalprotektinu. Jedná se t.č. výhradně o metody enzymové imunoanalýzy (sandwich ELISA), používající buď polyklonální, nebo monoklonální protilátky proti kalprotektinu. V literatuře je doposud málo informací o tom, do jaké míry jsou výstupy z různých souprav navzájem srovnatelné. Cílem této práce bylo proto srovnání dvou komerčně dostupných ELISA souprav k detekci fekálního kalprotektinu. U obou souprav jsme stanovili parametry variability měření (linearita, opakovatelnost, stabilita), senzitivitu a specificitu testů a provedli jsme srovnávací analýzu výsledků.
Materiál a metodiky
Soubor pacientů
Vyšetřili jsme vzorky stolice 61 nemocných, kteří absolvovali gastroenterologické vyšetření včetně kolonoskopie pro dolní dyspeptický syndrom, tj. pro bolesti břicha, průjmy, křeče v břiše a meteorismus. Soubor pacientů tvořilo 27 mužů a 34 žen ve věku 19 – 69 let (medián 38,4 roku). Na základě klinického vyšetření, kolonoskopie a dalších (zobrazovacích, histopatologických) vyšetření byla u 47 z vyšetřených osob stanovena diagnóza IBD (25 nemocných s Crohnovou nemocí a 22 nemocných s ulcerózní kolitidou), u 14 pacientů nebylo prokázáno zánětlivé střevní onemocnění.
Kontrolní skupinu tvořilo 98 zdravých osob, 50 mužů ( věk 16–66 let, medián 47,1 roku) a 48 žen (věk 17-63 let, medián 39,9 roku). Tyto osoby neměly akutní ani chronické zažívací obtíže, v rodinné ani osobní anamnéze nebyl údaj o výskytu IBD.
Provedení studie bylo schváleno Etickou komisí VFN v Praze.
Laboratorní vyšetření
Studovali jsme ELISA soupravy Calprotectin ELISA (Bühlmann, Bazilej, Švýcarsko), ve které je použita monoklonální protilátka proti kalprotektinu, a PhiCalTM Calprotectin ELISA (R-Biopharm, Darmstadt, Německo) využívající polyklonální protilátky proti kalprotektinu. Vzorek stolice o hmotnosti 50-100 mg byl odebrán do speciálních odběrových zkumavek Faecal Sample Preparation Kit Roche, umožňujících přesné zhotovení eluátu.
Byly analyzovány eluáty stolice, naředěné v poměru 1:50 eluačním roztokem podle pokynů výrobců souprav. Při analýzách (realizovaných manuálně) bylo postupováno podle pokynů výrobců. Referenční rozmezí normálních hodnot bylo stanoveno analýzou ROC křivek a srovnáno s výrobci doporučovaným referenčním rozmezím.
Technické parametry studovaných souprav uvádí tabulka 1.
Statistická analýza
Statistická analýza dat byla provedena s pomocí softwaru Statistica CZ 8.0 (Statsoft, Tulsa, USA). U obou souprav byly stanoveny parametry variability měření – linearita, opakovatelnost a stabilita, diagnostická hodnota testů – jejich senzitivita a specificita pro diagnózu IBD, a nakonec bylo provedeno srovnání výsledků vyšetření provedených dvěma testy (Pearsonův korelační koeficient, Bland-Altmanova analýza) [4]. ROC analýza byla provedena pomocí kalkulátoru JROCFIT 1.0.2 [12].
Za statisticky významný výsledek byla brána p-hodnota menší nebo rovna 0,05.
Výsledky
Linearita – diluční pokus
Linearita měření pomocí studovaných souprav byla hodnocena po naředění eluátu stolice se známou vysokou hodnotou fekálního kalprotektinu vzorkem neobsahujícím kalprotektin v rozmezí od 0 % do 100 % v krocích po 10 %, neboli od poměru 1:9 po 9:1. Každý vzorek se měřil v duplikátu. Pořadí měření jednotlivých vzorků bylo randomizované.
U obou souprav byly zjištěny dobré parametry linearity měření, u soupravy firmy R-Biopharm však nebyl uspokojivý tvar křivky u vysokých koncentrací – obrázek 1.
Variace v rámci testu a mezi testy (intra-assay a inter-assay charakteristiky)
Vyšetřili jsme 15 alikvot jednoho vzorku s vysokou a jednoho vzorku s nízkou koncentrací kalprotektinu v jeden den na různých pozicích mikrotitrační destičky. U obou souprav byly variační koeficienty měření vysokého i nízkého vzorku nižší než 10% - viz tabulka 2a.
Dále jsme připravili 8 alikvot jednoho vzorku s vysokou a jednoho vzorku s nízkou koncentrací kalprotektinu, které jsme zamrazili při teplotě - 20°C. Alikvoty jsme postupně rozmrazovali a v období od listopadu 2007 do března 2008 postupně stanovovali koncentrace kalprotektinu. Vzorky nebyly opakovaně rozmrazovány a zamrazovány. Variační koeficienty měření opět u obou souprav nepřevýšily hodnotu 10% - viz tabulka 2b.
Srovnání metod
Pro sledování závislosti mezi dvěma soubory měření byl použit výběrový korelační koeficient. Vypočtená hodnota r = 0,83 pro n = 159, α = 0,05 a kritickou hodnotu rk z tabulek = 0,197 svědčí pro signifikantní závislost.
Jak známo, korelační koeficient posuzuje míru závislosti mezi metodami, není kritériem pro posouzení shody výsledků [4]. Provedli jsme proto Bland-Altmanovu analýzu získaných dat. Rozdílový graf podle Blanda a Altmana uvádí na ose X průměr hodnot získaných dvěma srovnávanými metodami a na ose Y rozdíl hodnot získaných studovanými metodami. Obrázek 2a uvádí data bez transformace – vyplývá z něj heteroskedasticita naměřených hodnot (s rostoucí koncentrací rostou diference naměřených hodnot). Po logaritmické transformaci dat (obrázek 2b) jsou patrné limitní diference metod v rozmezí –17% až 30%.
Senzitivita a specificita
Pro obě studované imunoanalytické metody byly vypočteny hodnoty senzitivity a specificity testů pro diagnózu IBD.
Nejdříve jsme pomocí on-line kalkulátoru parametrů ROC křivek pro obě metody vypočetli hodnotu plochy pod křivkou: u soupravy Bühlmann byla plocha pod křivkou (ROC Area) 0,989 a u soupravy R-Biopharm 0,980. Tyto hodnoty se statisticky významně navzájem nelišily. Rovněž tak optimální cut-off bod (s nejvyšší senzitivitou a specificitou testu) byl pro obě soupravy podobný a nepatrně vyšší než cut-off hodnota udávaná výrobcem: 70 μg/g proti doporučovaným 50 μg/g. Diagnostická senzitivita a specificita obou testů je uvedena v tabulce 3.
Diskuse
Výskyt IBD v naší zemi neustále stoupá. Incidence ulcerózní kolitidy je odhadována na 8-12 na 100 000 obyvatel, incidence Crohnovy nemoci na 6-8 na 1 000 000 obyvatel. Obě nemoci postihují především osoby v produktivním věku a přes obrovské pokroky v diagnostice a léčbě se nepodařilo významně ovlivnit průběh těchto chorob, spočívající v opakovaných relapsech aktivity a nutnosti chirurgické léčby. Relapsy a komplikace IBD pacienty významně invalidizují, diagnostická a léčebná péče o ně je velmi nákladná. S přihlédnutím k ekonomické náročnosti diagnostických a léčebných postupů, které představuje především biologická léčba IBD, by zavedení jednoduché a neinvazivní diagnostické metody identifikace pacientů s aktivním zánětem střevní stěny mohlo mít významné preventivní dopady a umožnilo by posoudit časnou odpověď na podávanou léčbu.
V této souvislosti je v centru zájmu gastroenterologů a laboratoří vyšetřujících nemocné s IBD mimo jiného stanovení fekálního kalprotektinu. K nejrecentnějším zjištěním zahraničních autorů patří dobrá korelace hodnot fekálního kalprotektinu se stupněm postižení střeva ulcerózní kolitidou stanoveným podle Sutherlandových kritérií (r = 0,866) [34] nebo vynikající senzitivita (téměř 100%) a nižší specificita (67 – 80 %) u dětí s různými IBD [13,22,24]. Von Roonova kvantitativní meta-analýza prospektivních studií [33] poukazuje mj. na vyšší stupeň přesnosti vyšetření fekálního kalprotektinu při vyšší než běžně doporučované cut-off hodnotě tohoto analytu. V meta-analýze Lashnera et al. [21] bylo v databázích Medline, Ovid, Embase a Cochrane nalezeno na 30 klinických studií, v rámci kterých byl vyšetřen kalprotektin ve stolici u více než 6000 osob. U nemocných s IBD byl medián koncentrace kalprotektinu v séru 219,23 μg/g (95% interval spolehlivosti 174,5 – 263,9), což bylo signifikantně více než medián hodnot zdravých osob (p < 0,001).
V naší studii jsme prokázali dobré parametry přesnosti stanovení u obou studovaných ELISA souprav (intra- a inter-assay < 10%). Dilučním testem linearity byly prokázány lepší hodnoty u soupravy používající monoklonální protilátku, a to zejména u vysokých koncentrací kalprotektinu. Výsledky získané dvěma metodami navzájem uspokojivě korelovaly: Pearsonův korelační koeficient r = 0,83, limitní diference podle Blanda-Altmana–17% až 30%. Diagnostická senzivita testů byla 79 % pro soupravu Calprotectin ELISA Bühlmann a 74 % pro soupravu Calprotectin ELISA R-Biopharm, specificita 87 % pro soupravu Calprotectin ELISA Bühlmann a 84 % pro soupravu Calprotectin ELISA R-Biopharm. Obě studované soupravy tedy měly dobré a srovnatelné parametry měření, příznivější hodnoty vykázala souprava využívající monoklonální protilátky proti kalprotektinu.
Při posuzování imunoanalytických metod stanovení kalprotektinu ve stolici je třeba vzít v úvahu, že kalprotektin je organická makromolekula, která je do určité míry variabilní a která se navíc vyskytuje v heterokomplexech (především v dimerech) [11,17]. Formátem obou studovaných diagnostických souprav je sendvičová enzymová imunoanalýza se dvěma protilátkami cílenými proti různým epitopům kalprotektinu. U soupravy firmy Bühlmann je podle informací výrobce na mikrotitrační destičce imobilizována monoklonální protilátka rozeznávající unikátní epitop na heterokomplexu molekuly kalprotektinu v nevariabilním úseku molekuly, přičemž tento epitop není imunogenní na samostatných podjednotkách molekuly (tj. MRP 8 a MRP 14). Tím je na minimum redukován vliv variabilního složení molekuly kalprotektinu na výsledky stanovení. Souprava firmy R-Biopharm využívá polyklonální králičí protilátky proti šesti různým epitopům v nevariabilním úseku heterokomplexu molekuly kalprotektinu, čímž je zajištěna minimalizace výskytu falešně negativních výsledků. Je potěšitelnou skutečností, že studované komerčně dostupné metody mezi sebou uspokojivě korelují, a tudíž není naléhavě nutné zavedení referenčních kalibrátorů. Je nicméně zřejmé, že zavedením referenčních materiálů lze zdokonalit korelaci komerčně dostupných metod [28]. Vyvstane-li potřeba deklarovat některou z dostupných metod jako neformální “zlatý standard”, přikláníme se k enzymové imunoanalýze s využitím monoklonálních protilátek, a to z důvodu lepších parametrů variability, jakož i senzitivity a specificity. Ačkoliv by výběr takové metody mohl přispět ke zlepšení reprodukovatelnosti mezi metodami, otázkou je, jak by takovou volbu vnímali výrobci konkurenčních souprav a jaká by byla ochota výrobce “zlatého standardu” odkrýt část důvěrných know-how informací.
Vyšetření stolice je zcela neinvazivním přístupem. Ve srovnání s obvyklými imunoanalytickými metodami vyšetření krve však analýza fekálních vzorků vyžaduje ještě větší pečlivost v preanalytické fázi vyšetření, při které hrozí zvýšené riziko preanalytické chyby – odběrem stolice počínaje, přes správné uchovávání primárního vzorku až po přesné zhotovení eluátu. Na rozdíl od jiných biologických materiálů ovlivňuje složení vzorku stolice např. relativní poměr pevných a tekutých složek, který má vliv na nutné konstantní množství stolice pro testování, což rovněž může způsobit analytické chyby.
Závěrem konstatujeme, že obě studované ELISA soupravy k detekci fekálního kalprotektinu jsou dostatečně robustní, mají dobré a srovnatelné parametry měření. Dostupnost, citlivost a výkonnost ELISA testů fekálního kalprotektinu lze (s vědomím specifik fekálních vzorků) dobře využít v klinické praxi.
Poděkování
Tato práce byla podpořena grantem IGA MZd ČR č. NR/9094-4/2006.
Do redakce došlo 23. 7. 2008
MUDr. Karin Malíčková
Klinická imunologie a alergologie, ÚKBLD VFN a LF UK
Karlovo nám. 32
121 11 Praha 2
e-mail: kmali@lf1.cuni.cz
Sources
1. Aadland, E., Fagerhol, M.K. Faecal calprotectin: a marker of inflammation throughout the intestinal tract. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2002, 14, 823-825.
2. Amati, L., Passeri, M.E., Selicato, F. New insights into the biological and clinical significance of fecal calprotectin in inflammatory bowel disease. Immunopharmacol Immunotoxicol 2006, 28, 665-681.
3. Berni Canani, R., Terrin, G., Rapacciuolo, L. Faecal calprotectin as reliable non-invasive marker to assess the severity of mucosal inflammation in children with inflammatory bowel disease. Dig Liver Dis 2008, 40(7), 547-53.
4. Bland, J.M., Altman, D.G. Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement. Lancet 1986, 1(8476), 307-310.
5. Bremner, A., Roked, S., Robinson, R. et al. Faecal calprotectin in children with chronic gastrointestinal symptoms. Acta Paediatr 2005, 94, 1855-1858.
6. Bunn, S.K., Bisset, W.M., Main, M.J. Fecal calprotectin as a measure of disease activity in childhood inflammatory bowel disease. Pediatr Gastroenterol Nutr. 2001, 32, 171-177.
7. Carroccio, A., Iacono, G., Cottone, M. et al. Diagnostic accuracy of fecal calprotectin assay in distinguishing organic causes of chronic diarrhea from irritable bowel syndrome: a prospective study in adults and children. Clin Chem 2003, 49, 861-867.
8. Costa, F., Mumolo, M.G., Bellini, M. et al. Role of faecal calprotectin as non-invasive marker of intestinal inflammation. Dig Liver Dis 2003, 35, 642-647.
9. Costa, F., Mumolo, M.G., Ceccarelli, L. et al. Calprotectin is a stronger predictive marker of relapse in ulcerative colitis than in Crohn’s disease. Gut 2005, 54, 364-368.
10. De Jong, N.S., Leach, S.T., Day, A.S. Fecal S100A12: a novel noninvasive marker in children with Crohn’s disease. Inflamm Bowel Dis 2006, 12, 566-572.
11. D’Inca, R., Dal Pont, E., Di Leo, V. et al. Calprotectin and lactoferrin in the assessment of intestinal inflammation and organic disease. Int J Colorectal Dis 2007, 22, 429-437.
12. Eng, J. Receiver operating characteristic analysis: a primer. Acad Radiol 2005, 12(7), 909-916.
13. Fagerberg, U.L., Loof, L., Lindholm, J. Fecal calprotectin: a quantitative marker of colonic inflammation in children with inflammatory bowel disease. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2007, 45, 414-420.
14. Fagerberg, U.L., Loof, L., Merzoug, R.D. et al. Fecal calprotectin levels in healthy children studied with an improved assay. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2003, 37, 468-472.
15. Fagerberg, U.L., Loof, L., Myrdal, U. Colorectal inflammation is well predicted by fecal calprotectin in children with gastrointestinal symptoms. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2005, 40, 450-455.
16. Fagerhol, M.K. Calprotectin, a faecal marker of organic gastrointestinal abnormality. Lancet 2000, 356, 1783-1784.
17. Johnson, M.W., Maestranzi, S., Duffy, A.M. et al. Faecal calprotectin: a noninvasive diagnostic tool and marker of severity in pouchitis. Eur J Gastroenterol Hepatol 2008, 20, 174-179.
18. Kaiser, T., Langhorst, J., Wittkowski, H. Faecal S100A12 as a non-invasive marker distinguishing inflammatory bowel disease from irritable bowel syndrome. Gut 2007, 56, 1706-1713.
19. Langhorst, J., Elsenbruch, S., Koelzer, J. et al. Noninvasive markers in the assessment of intestinal inflammation in inflammatory bowel diseases: performance of fecal lactoferrin, calprotectin, and PMN-elastase, CRP, and clinical indices. Am J Gastroenterol 2008, 103, 162-169.
20. Langhorst, J., Elsenbruch, S., Mueller, T. et al. Comparison of 4 neutrophil-derived proteins in feces as indicators of disease activity in ulcerative colitis. Inflamm Bowel Dis 2005, 11, 1085-1091.
21. Lashner, B.A. How useful is fecal calprotectin for the diagnosis of IBD and colorectal cancer ? Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2008, 5, 16-17.
22. Leach, S.T., Yang, Z., Messina, I. et al. Serum and mucosal S100 proteins, calprotectin (S100A8/S100A9) and S100A12, are elevated at diagnosis in children with inflammatory bowel disease. Scand J Gastroenterol 2007, 42, 1321-1331.
23. Lundberg, J.O., Hellstrom, P., Fagerhol M.K. et al. Technology insight: calprotectin, lactoferrin and nitric oxide as novel markers of inflammatory bowel disease. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2005, 2, 96-102.
24. Olafsdottir, E., Aksnes, L., Fluge, G. et al. Faecal calprotectin levels in infants with infantile colic, healthy infants, children with inflammatory bowel disease, children with recurrent abdominal pain and healthy children. Acta Paediatr 2002, 91, 45-50.
25. Pardi, D.S., Sandborn, W.J. Predicting relapse in patients with inflammatory bowel disease: what is the role of biomarkers? Gut 2005, 54, 321-322.
26. Parry, S., Forgacs, I. Intestinal infection and irritable bowel syndrome. Eur J Gastroenterol Hepatol 2005, 17, 5-9.
27. Roseth, A.G., Aadland, E., Jahnsen, J. et al. Assessment of disease activity in ulcerative colitis by faecal calprotectin, a novel granulocyte marker protein. Digestion 1997, 58, 176-180.
28. Schoepfer, A.M., Trummler, M., Seeholzer, P. et al. Accuracy of four fecal assays in the diagnosis of colitis. Dis Colon Rectum 2007, 50, 1697-1706.
29. Schoepfer, A.M., Trummler, M., Seeholzer, P. et al. Discriminating IBD from IBS: comparison of the test performance of fecal markers, blood leukocytes, CRP, and IBD antibodies. Inflamm Bowel Dis 2008, 14, 32-39.
30. Summerton, C.B., Longlands, M.G., Wiener, K. Faecal calprotectin: a marker of inflammation throughout the intestinal tract. Eur J Gastroenterol Hepatol 2002, 14, 841-845.
31. Tibble, J., Teahon, K., Thjodleifsson, B. et al. A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn’s disease. Gut 2000, 47, 506-513.
32. Vermeire, S., Van Assche, G., Rutgeerts, P. Laboratory markers in IBD: useful, magic, or unnecessary toys? Gut 2006, 55, 426-431.
33. Von Roon, A.C., Karamountzos, L., Purkayastha, S., Reese, G.E., Darzi, AW. et al. Diagnostic precision of fecal calprotectin for inflammatory bowel disease and colorectal malignancy. Am J Gastroenterol 2007, 102(4), 803-813.
34. Xiang, J.Y., Ouyang, Q., Li, G.D. Clinical value of fecal calprotectin in determining disease activity of ulcerative colitis. World J Gastroenterol 2008, 14, 53-57.
Labels
Hygiene and epidemiology Medical virology Clinical microbiologyArticle was published in
Epidemiology, Microbiology, Immunology
2008 Issue 4
Most read in this issue
- Rezistence enterobakterií ke karbapenemům
- Stanovení koncentrace kalprotektinu ve stolici u nemocných s idiopatickými střevními záněty - srovnání dvou komerčních testů
- Detekce ß-laktamáz typu AmpC u gramnegativních bakterií izolovaných z moče
- Ilja Iljič Mečnikov a Paul Ehrlich:laureáti Nobelovy ceny v r. 1908 za práce o imunitě