Svalové dystrofie detekovanéimunofenotypizací a analýzou genotypu(m-RNA a DNA)

Overview

Komplexní vyšetřování svalových dystrofií pomocí klinických, bioptických a molekulárně genetických diagnostických metod se v naší zemi dosud provádělo pouze ve velmi omezeném rozsahu.Naše skupina (kliniků, patologů a genetiků) vyšetřila od roku 1992 do roku 2000 přibližně 240pacientů suspektních ze svalové dystrofie. Většina pacientů pochází z jihomoravského a severomoravského regionu. Pacienti byli k vyšetření odesíláni zejména z klinik a oddělení neurologiea dětské neurologie, dále z oddělení klinické genetiky a méně často z interních klinik a oddělení.Vyšetřovaní pacienti byli podle závěrečné diagnózy rozděleni do skupin pacientů s dystrofinopatií (DMD a BMD), přenašeček dystrofinopatií, pacientů s kongenitální svalovou dystrofií s deficitem merosinu a pacientů s Emery-Dreifussovou svalovou dystrofií, včetně přenašeček tohotoonemocnění. Někteří členové rodin, v nichž se vyskytla dystrofinopatie, byli následně vyšetřenimetodami segregační analýzy.Pacienti DMD/BMD mohou být pomocí molekulárně genetických metod zachyceni ve vysokémprocentu. Metoda vyšetření mRNA pomocí RT PCR a PTT z biopsie dovoluje detegovat delece,duplikace, ale i bodové mutace dystrofinového genu, a tím má vyšší diagnostický rozsah než vyšetření DNA lymfocytů periferní krve metodou multiplex PCR, které zachytí 65 % všech mutací,prakticky jenom delece. Imunofenotypizace dystrofinu se uplatní zejména v odhalování DMD.Deficit sarkolemové reaktivity v karboxyterminální a střední doméně (Dys 1 a Dys 2) jednoznačněsignalizuje defektní dystrofin. Naproti tomu menší deficity dystrofinu u BMD (a též u přenašeček)nemusejí být v biopsii zachyceny. V těchto případech je nutné doplnit vyšetření imunoblotingemnebo analýzou genotypu.Vyšetřování pacientů s klinicky diagnostikovanou svalovou dystrofií by mělo většinou začít vyšetřením biopsie, z níž je možno odhadnout přítomnost a stupeň strukturálních změn, a aplikacíprotilátek proti DGC případně odhalit patřičný deficit. Imunohistochemické vyšetření je možnédoplnit imunoblotingem a tak navést další molekulárně genetické vyšetření DNA či mRNA. Svalovou biopsii je možno v případě deficitu merosinu a emerinu nahradit méně invazivními metodami, jako kožní biopsií nebo výtěrem z bukální sliznice.Při deficitech proteinů DGC je nutno při interpretaci nálezů respektovat možnost sekundárníalterace jiných složek, a tak imunohistochemie sama o sobě nemusí být dostatečně informativní.Identifikace a bližší diagnostické zařazení pacientů s deficitem merosinu, sarkoglykanů, emerinu,kalpainu a dalších je možné díky možnosti použití protilátek, které jsou na trhu. Detekce těchtopacientů v naší zemi teprve čeká na jejich soustavné vyhledávání opřené o aplikaci metod popsaných a diskutovaných v tomto sdělení.

Klíčová slova:
imunofenotypizace - molekulární genetika - svalové dystrofie