Apoptóza - vybrané metody detekce apoptózya asociovaných regulačních faktorů natkáňových řezech z nádorového materiálu

Overview

K detekci apoptózy (AP) na tkáňových řezech lze využít morfologické hodnocení AP figur světelnouči elektronovou mikroskopií a imunohistochemický průkaz antigenů asociovaných s AP. Bcl-2u řady nádorů inverzně koreluje s AP a je nepřímým markerem počtu AP figur. Imunohistochemickýprůkaz je bezproblémový. Tkáňovou transglutaminázu, která je výrazně exprimovánai v neapoptotických buňkách, nelze považovat za specifický marker AP. Podobně FAS, jehož expresenemusí být bezpodmínečně spojena se vstupem buňky do AP. Kaspázy: v současnosti používanáimunohistochemická detekce nerozlišuje aktivní a neaktivní formy těchto enzymů. AnexinV: technika, detekující fosfatidylserin, normálně lokalizovaný na vnitřní straně buněčné membrány,jenž je při apoptotickém procesu detekovatelný i extracelulárně. Průkaz Anexinu V značenéhokoloidním zlatem lze využít k detekci AP imunoelektronovou mikroskopií, nicméně jde o velmináročnou metodiku. TUNEL, ISEL, ISNTA jsou metody, které označují zlomy DNA vznikající přiapoptóze. TUNEL ve srovnání s morfologickým hodnocením AP figur detekuje o cca 20 % apoptotickýchbuněk více. Označeny mohou být i fragmenty DNA vznikající v jádrech během reparace,po elektrokoagulaci, při autolýze, následkem fixace a řezání tkání. Apostain je metoda založenána průkazu jednovláknových zlomů DNA pomocí monoklonální protilátky, která využívá sníženoustabilitu apoptotické DNA vůči termální denaturaci způsobující její zlomy. Protilátka M30 Cyto-Death detekuje neoepitopy vzniklé při štěpení cytokeratinu 18 kaspázami. Ve srovnání s TUNELemchybí exprese v nekrotických buňkách, neoznačuje však buňky v pokročilých stadiích AP(tělíska). Na rozdíl od některých pilotních studií se nám u M30 (Roche) nepodařilo docílit dostatečnousenzitivitu ani specificitu při detekci AP na mamárních karcinomech. Rutinní, resp. automatizovanéhodnocení AP vyžaduje ověření a standardizaci dalších metodik.

Klíčová slova:
apoptóza - regulace - detekovat