První zkušenosti s neinvazivní RH genotypizací plodu z periferní krve u aloimunizovaných těhotenství

First experience with non-invasive foetal RH genotyping from maternal peripheral blood in alloimmunised pregnancies

In this prospective study, we described our first experience with non-invasive foetal RH genotyping in alloimmunised pregnancies by analysis of DNA extracted from maternal plasma samples by using real-time PCR and primers and probes targeted toward RHD and RHCE genes. We analysed 22 alloimmunised pregnant women (15 anti-D, 5 anti-D+C, 2 anti-E) within 11^th and 33^rd week of pregnancy and correlated the results with serological analysis of cord blood. Non-invasive prenatal foetal RHD and RHCE genotyping analysis of maternal plasma samples was in complete concordance with the analysis of cord blood in all alloimmunised pregnancies. Non-invasive foetal RHD and RHCE genotyping enables the identification of foetuses at risk of haemolytic disease of the newborn. An identification of negative foetuses may exclude the demand of invasive prenatal procedures.

Key words:
foetal DNA, haemolytic disease of the newborn, quantitative real-time PCR, maternal plasma, RHD gene, RHCE gene

Autoři: I. Hromadníková ¹; K. Veselá ¹; B. Benešová ²; K. Nekovářová ⁴; D. Dušková ⁵; R. Vlk ³; I. Špálová ³; Romana Gerychová ⁶; A. Hakenová ⁸; M. Janoušková ⁹; Z. Rosenbaumová ¹⁰; P. Vlašín ¹¹; A. Vlachová ¹²; P. Smejkal ⁷; V. Palásek ¹³; E. Langrová ¹⁴; E. Rožňáková ²; P. Calda ⁴
Působiště autorů: Pediatrická klinika ¹; Krevní banka ²; Gynekologicko-porodnická klinika, 2. LF UK a Fakultní nemocnice Motol, Praha ³; Gynekologicko-porodnická klinika a ⁴; Transfuzní oddělení, VFN a 1. LF UK, Praha ⁵; Gynekologicko-porodnická klinika a ⁶; Oddělení klinické hematologie, Fakultní nemocnice Brno ⁷; Transfúzní oddělení, Fakultní Thomayerova nemocnice, Praha ⁸; Transfuzní oddělení, Nemocnice Karlovy Vary ⁹; Ženská klinika, Masarykova nemocnice v Ústí n. L. ¹⁰; Gynekologická a ultrazvuková ambulance, Centrum prenatální diagnostiky, Brno ¹¹; Transfuzní oddělení, Fakultní nemocnice Královské Vinohrady ¹²; Gynekologicko-porodnické oddělení a ¹³; Hematologicko-transfuzní oddělení, Nemocnice Kladno ¹⁴
Vyšlo v časopise: Transfuze Hematol. dnes,11, 2005, No. 1, p. 17-20.
Kategorie: Souhrnné práce, původní práce, kazuistiky

Souhrn

V této prospektivní studii shrnujeme naše první zkušenosti s neinvazivní prenatální RH genotypizací plodu u aloimunizovaných těhotenství s využitím PCR v reálném čase, specifických primerů a TaqMan sond navržených pro RHD a RHCE geny. Celkem bylo testováno 22 aloimunizovaných těhotných žen (15 anti-D, 5 anti-D+C, 2 anti-E) v rozmezí 11. až 33. týdne gravidity. Výsledky neinvazivní prenatální RHD a RHCE genotypizace plodu provedené na DNA extrahované z periferní krve matek jsme korelovali s výsledky imunohematologické analýzy pupečníkové krve. Výsledky RHD a RHCE genotypizace plodu byly ve shodě s vyšetřením pupečníku u všech vyšetřených aloimunizovaných těhotných žen. Neinvazivní prenatální RHD a RHCE genotypizace plodu umožňuje identifikaci plodů v riziku hemolytického onemocnění. Detekce negativních plodů v současné graviditě může vyloučit potřebu invazivního prenatálního vyšetření.

Klíčová slova:
fetální DNA, hemolytické onemocnění plodu, kvantitativní PCR v reálném čase, mateřská plazma, RHD gen, RHCE gen