In vitro kultivace mezenchymových kmenovýchbuněk u pacientů s lymfoidními malignitami

English info

In vitro Cultivation of MesenchymalStem Cells in Patients with Lymphoid Malignancies

Background.
Mesenchymal stem cells (MSC) are currently extensively studied because of their abilitiesto support haemopoiesis, to modulate immune reactions (including GVHD) and to differentiate intospecialized tissues (cartilage, bone, smooth muscle). In our laboratory we studied growth properties ofmesenchymal stem cells in patients with lymphoid malignancies. Materials and methods. 10 ml of bonemarrow aspirate was taken from patients undergoing routine diagnostic or control trephine biopsy.After separation of mononuclear cells (MNC), adhesive MNCs and fibroblasts were counted and theirnumber expressed per 105 total MNCs. Mesenchymal cells were grown in complete medium (α-MEM +20% fetal bovine serum + glutamine + antibiotics). We evaluated the number of colonies from the 1stpassage (per 105 total MNCs = CFU-F1), number of MSCs from the 1st passage and number of MSCcolonies grown from the 2nd passage (CFU-F2) after seeding in concentrations of 1.5, 3, 5 a 10 cells/cm2.Results. Samples were taken from 44 patients; from 15 of them bilateral samples were obtained. Thenumber of CFU-F1 correlated significantly only with the number of adhesive fibroblasts. The numberof CFU-F2 colonies showed an approximately linear correlation with the concentrations of cells seeded.Patients with chronic lymphocytic leukaemia and multiple myeloma had higher CFU-F2 counts thanpatientswith lymphoma.When bilateral samples were taken, very good correlations between the countsof adherent MNCs, fibroblasts, CFU-F1 and CFU-F2 were observed in both samples from the samepatient. Conclusion. Our method of evaluation of MSC numbers in bone marrow seems reproducibleand reliable. Different growth characteristics of MSCs in patients with different lymphoidmalignanciescan be caused by different profiles of cytokine secretion, which can in turn influence the pathogenesisof these diseases.

Key words:
mesenchymal stem cells, lymphoma, chronic lymphocytic leukaemia, myeloma

Autoři: E. Novotová ¹; H. Strnadová ¹; B. Procházka ²; R. Pytlík ¹
Působiště autorů: 1. interní klinika 1. LF UK a VFN, Praha 2Oddělení biomedicíny a statistiky, Státní zdravotní ústav, Praha ¹
Vyšlo v časopise: Transfuze Hematol. dnes,, 2003, No. 1, p. 30-36.
Kategorie: Články

Souhrn

Úvod.
Mezenchymové kmenové buňky (MSC) jsou v současné době intenzivně zkoumány pro svéschopnosti podpory krvetvorby, modulace imunitních funkcí (včetně GVH nemoci) a diferenciacesměrem ke specializovaným tkáním (chrupavka, kost, hladké svalstvo).V naší laboratoři jsme zkoumalirůstové vlastnosti mezenchymových kmenových buněk u pacientů s lymfoidními malignitami. Materiálya metody. 10 ml kostní krve bylo odebráno pacientům podstupujícím rutinní diagnostickou čikontrolní trepanobiopsii kostní dřeně. Po separaci mononukleárních buněk (MNC) byl spočten početadherujících MNC a fibroblastů na 105 celkových MNC. Mezenchymové buňky byly pěstovány v kompletnímmédiu (α-MEM + 20% fetální telecí sérum+ glutamin + antibiotika).Hodnocen byl počet koloniíz 1. pasáže (na 105 buněk kostní krve, CFU-F1), počet MSC vypěstovaných z 1. pasáže a počet mezenchymovýchkolonií vypěstovaných ze 2. pasáže (CFU-F2) po nasazení v koncentraci 1.5, 3, 5 a 10buněk/cm2. Výsledky. Celkem bylo odebráno 44 pacientů, z toho 15 oboustranně. Počet kolonií z 1.pasáže signifikantně koreloval pouze s počtem adherujících fibroblastů. Počet kolonií z 2. pasáževykazoval zhruba lineární závislost na koncentraci nasazených buněk a koreloval s diagnózou pacienta(pacienti s chronickou lymfadenózou a mnohočetným myelomem měli výrazně více sekundárníchkolonií než pacienti s lymfomy). U pacientů s oboustrannými odběry bylo dosaženo velmi dobrýchkorelací v počtu adherujících MNC, adherujících fibroblastů a primárních i sekundárních kolonií.Závěr. Podařilo se zavést spolehlivou a reprodukovatelnou metodu stanovení počtu MSC v kostní dřenipacientů s lymfoidními malignitami. Lepší růst MSC u pacientů s myelomem a CLL může být způsobenodlišným profilem sekrece cytokinů těmito buňkami a může se podílet na patogenezi uvedenýchonemocnění.

Klíčová slova:
mezenchymová kmenová buňka, lymfom, lymfatická leukémie, myelom

Plné znění tohoto článku není v digitalizované podobě.

V případě zájmu kontaktujte NTO ČLS JEP, které vám může poskytnout sken časopisu.