GENOVÁ EXPRESE BÍLÝCH KRVINEK U CHRONICKÉMYELOIDNÍ LEUKÉMIE

Overview

Východisko.
Nové biočipové technologie umožňují současné sledování velkého počtu genů včetně semikvantita-tivního vyhodnocení jejich aktivity. V souvislosti s výzkumným zaměřením oddělění molekulární genetiky Ústavuhematologie jsme pomocí této nové techniky vyšetřili několik pacientů s diagnózou chronické myeloidní leukémie(CML), u které za jednu z hlavních patogenních změn je považován vznik fúzního bcr/abl genu, jehož produktemje protein s konstitutivní tyrozin kinázovou aktivitou, která se vymyká normální regulaci. Cílem studie bylo stanoveníprofilu genové exprese buněk periferní krve pacientů s chronickou myeloidní leukémií (s přestavbou bcr/abl) v doběplně rozvinutého, ale ještě neléčeného onemocnění v porovnání s normálními buňkami zdravých osob.Metody a výsledky. Pro sledování genové exprese jsme využili Atlas Array technologii (firma CLONTECH),která zahrnuje izolaci RNA, přepis RNA na cDNA za současného radioaktivního značení32P. Radioaktivně značenácDNA byla hybridizována na Atlas Human Cancer cDNA Expression Array s 588 geny. Detekce signálů bylaprovedena autoradiograficky a pro vyhodnocení expresní aktivity byl použit software AtlasImage 1.5 (CLONTECH).Genová exprese byla studována u pěti pacientů s diagnózou CML a jedné kontrolní zdravé osoby. Z periferní krvebyly izolovány leukocyty a u tří pacientů byly leukocyty separovány na granulocyty a mononukleární buňky. Genováexprese pacientů byla porovnána s genovou expresí kontrolní osoby. Expresní profily pacientů se dosti překrývalya my jsme se zaměřili na největší rozdíly v expresi genů ve srovnání s kontrolou. Mezi geny, které u pacientůvykazovaly shodné změny v expresi, patří c-jun N-terminální kináza, MMP-8, MMP-9, integrin a E, integrin b,PDGF (zvýšená exprese) a ZAP-70, IRF1, MCL-1, STAT 5B, RARA, CDC25B, RPSA, TNFR (snížená exprese).Druhou skupinu tvoří geny, jejichž exprese se výrazně lišila od kontroly, ale u pacientů se vyskytují nepravidelně(„jednotlivě”) - PCNA, MMP-17, CD59, rho G, CRAF1, PIG7 (zvýšená exprese) a notch, caspase 8, caspase 4,interleukin 6 receptor, rho B, TIMP1 (snížená exprese) atd.Závěry. Sledování expresních profilů u pacientů se stejnou diagnózou může přispět k odhalení genů, kteréparticipují na rozvoji daného onemocnění. Všeobecně se soudí, že ačkoliv je vznik bcr/abl fúzního genu hlavnípříčinou, není jedinou determinantou určující rozvoj CML. Předkládaná studie vedla k odhalení změn genovéexprese, které byly zřetelně vyjádřeny u všech pacientů a které lze proto považovat za typické, a ukázala změnyvyjádřené jen v některých vzorcích. Ty ukazují na individuální variabilitu.

Klíčová slova:
chronická myeloidní leukémie, genová exprese, array technologie.