Prevalence druhů Borrelia burgdorferi sensu latou pacientů v České republice; přímá sekvenačníanalýza a polymerázová řetězová reakce v reálném čase

Overview

Rozšíření borreliózy závisí na geografických, ekologických a klimatických faktorech, stejně jako napatogenezi vlastního agens skupiny Borrelia burgdorferi sensu lato. Zájem vzbuzuje nárůst případůtéto choroby a objevení nových příznaků. Vztah genodruhů k symptomům, jejich geografické rozšířenía možnost spolupůsobení dalších patogenů je předmětem naší studie.Do studie bylo zahrnuto 87 pacientů s borreliózou ze středních, východních Čech a z Moravy.Pacienti skupiny 1 (celkem 49) byli zařazeni podle pozitivní kliniky, pacienti skupiny 2 (celkem 21)se rekrutovali z pozitivních screeningovou metodou PCR a pacienti skupiny 3 (celkem 17) bylipozitivní kultivačně. Celkem 48 pacientů a 17 izolovaných kmenů bylo pozitivních v konvenčnínested PCR pro plazmidy a genom B. burgdorferi sensu lato. Genodruhy a subtypy borrelií bylyprokázány přímou sekvenací OspA a OspC produktů. Kvantitativní data byla determinována pomocíkřivky tání specifického produktu užitím PCR v reálném čase.Sekvenací fragmentů OspA genu jsme u pacientů ze středních Čech prokázali přítomnost B. garinii,subtypy 6, 5, 4, 3 v 51,8 % (14 z 27), B. burgdorferi s.s v 29,6 % (8 z 27) a B. afzelii v 18,5 % (5 z 27). Vevýchodní oblasti prevalovala B. garinii, subtyp 5 a v 7,6 % byla společná infekce s Anaplasmaphagocytophilum. Prevalence B. afzelii v 44 % (11 z 25) následovaná B. burgdorferi s.s. v 36 % (9 z 25)a v 20 % zbývající infekcí B. garinii byla u pacientů z Moravy. Sekvence dvou hypervariabilníchoblastí OspC a OspA genů a vzdálenosti sekvencí ve fylogenetických stromech ukázaly rozdíly nejenmezi genodruhy a subtypy ale i mezi „divokými“ kmeny, prokázanými přímou sekvencí ve vzorcíchpacientů a „arteficiálními“ kmeny, kultivovanými in vitro. Největší rozdíly byly u dlouhodoběnemocných borreliózou.

Klíčová slova:
borrelióza – PRC v reálném čase – sekvenační analýza.