#PAGE_PARAMS# #ADS_HEAD_SCRIPTS# #MICRODATA#

Metoda izolace DNA může ovlivnit stupeňpreferenční amplifikace alel polymerázovouřetězovou reakcí


Authors: M. Korabečná
Authors‘ workplace: Biologický ústav LF UK, Plzeň, vedoucí doc. RNDr. J. Reischig, CSc.
Published in: Čes.-slov. Patol., , 2000, No. 1, p. 2-5
Category:

Overview

Polymerázová řetězová reakce je dnes běžnou součástí postupů sloužících k identifikaci osobv soudním lékařství. Tato metoda je jednoduše proveditelná, pozornost však vždy musí být věno-vána optimalizaci reakčních podmínek a interpretaci výsledků. Z literatury jsou známy případy,kdy při amplifikaci extrémně malého množství DNA (např. z jediné buňky) došlo během polymerá-zové řetězové reakce k preferenčnímu namnožení jen jedné ze dvou v templátové DNA přítom-ných alel. Pokud se amplifikované fragmenty liší délkou, dochází k preferenční amplifikaciu kratšího z nich, což může být příčinou zavádějících výsledků. V prezentované práci bylo 23skvrn mužské krve na různých textilních materiálech podrobeno izolaci DNA dvěmi různýmimetodami (pomocí proteinázy K a povaření a pomocí Chelexu 100). Získaná DNA byla amplifiko-vána za použití primerů komplementárních k sekvencím genu pro amelogenin. Systém je vhodnýpro určení pohlaví jedince, neboť namnožením X chromosomální sekvence poskytuje fragmento délce 632 bp, amplifikací Y chromosomální sekvence fragment o délce 443 bp. Izolační metodavyužívající proteinázy K vedla v 17,38 % vzorků k velmi intenzivní preferenční amplifikaci delšíalely a tím k nesprávnému výsledku. Izolační metoda založená na působení Chelexu 100 poskytlavždy správný výsledek s jasně patrnou preferenční amplifikací kratší alely. Uvedené výsledkypodtrhují důležitost volby vhodné izolační metody, nutnost pečlivé optimalizace PCR a opatrnéinterpretace jejích výstupů.

Klíčová slova:
polymerázová řetězová reakce (PCR) - izolace DNA - identifikace osob - preferenčníamplifikace

Full text is not available online.
If interested in a scan of this journal, contact NTO ČLS JEP.

Labels
Anatomical pathology Forensic medical examiner Toxicology
Topics Journals
Login
Forgotten password

Enter the email address that you registered with. We will send you instructions on how to set a new password.

Login

Don‘t have an account?  Create new account

#ADS_BOTTOM_SCRIPTS#