REPERFUZNIPOSKOZENIIZOLOVANYCH JATER POTKANU PO HYPOTERMNÍM SKLADOVÁNÍ

Overview

Histologický obraz změn byl sledován na modelu reperfizndovaných jater, které předtím byly vystaveny kombinaci studené a teplé ischémie. Studenou ischémii představovalo 0 hod., 3 hod., 24 hod. či 48 hod. hypotermního uložení izolovaných jater v UW (University of Wisconsin) roztoku, po němž následovalo 30 minut teplé ischémie a 90 minut normotermní reperfizze Krebsovým roztokem s erytrocyty. Ke studiu a ke kvantifikaci poškozených buněk byla použita obrazová analýza histologických preparátů pro světelnou mikroskopii, které byly obarveny methylovou zelení - pyroninem. K průkazu případné apoptózy sinusoidálních endotelových buněk (SEB) a hepatocytů bylo provedeno histochemické barvení TUNEL. Byla sledována také produkce žluči během reperfuze a aktivity několika biochemických parametrů (ALT, AST, LD, ACP) v perfizzním roztoku na konci 90minutové reperfizze. Potvrdilo se, že prodloužení studené ischémie vede k výrazným změnám ve stavbě jaterního parenchymu a poškození jaterních buněk se prohlubuje. Více a dříve jsou poškozeny SEB než hepatocyty. Ukázalo se, že výhodným barvením pro sledování morfologických změn je barvení methylovou zelení - pyroninem. Umožnilo nejvýraznější přehled změn, ke kterým dochází v průběhu KRP jater. Výskyt TUNEL pozitivních buněk a zvýšení hodnot aktivit biochemických parametrů např. ALT, AST indikují časnější poškození buněk. Naši metodiku lze použít pro sledování konzervačně reperfizzního poškození jater, příp. pro studium tohoto fenoménu za jiných experimentálních podmínek.

Klíčová slova:
játra - studená ischémie - reperfizzní poškození - světelná mikroskopie - kvantifikace změn